产品货号:
RFT038
中文名称:
植物基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
Plant genomic DNA Extraction Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
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本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,能提取多种植物细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
组分 | 规格 | 保存 |
缓冲液AP1 | 25mL | 室温 |
缓冲液AP2 | 10mL | |
缓冲液AP3(浓缩液) | 15mL | |
漂洗液PW(浓缩液) | 25mL | |
洗脱缓冲液EB | 15mL | |
吸附柱CG(白色) | 50个 | |
过滤柱CF | 50个 | |
收集管 | 100个 | |
RNase A(10mg/mL) | 0.5mL | -20℃ |
保存:室温,有效期1年,其中RNase A需置于-20℃保存。
本试剂盒在室温(25℃左右)干燥条件下,可保存1年;更长时间的保存可置于2~8℃。2~8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNaseA收到后-20℃保存。
提取得率:
材料 | DNA得量(μg/100mg) |
Arabidopsis | 3~4μg |
Barley | 8~12μg |
Maize | 15~20 |
Pine | 20~25 |
Potato | 4~6 |
Rape | 2~4 |
Spinach | 5~10 |
Tobacco | 20~25 |
Wheat | 25~30 |
- 准备液氮;65℃水浴;无水乙醇;1.5mL灭菌离心管。
- 按照标签所示在缓冲液AP3和漂洗液PW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
- 每次使用前请检查缓冲液AP1、缓冲液AP2和缓冲液AP3是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
- 如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
- 取适量植物新鲜组织0.5~1g加入液氮充分研磨,取约100mg粉末置于1.5mL离心管中,加入400μL缓冲液AP1和6μL RNaseA (10mg/mL),漩涡震荡1分钟。
- 将离心管放在65℃水浴10分钟,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
- 加入130μL缓冲液AP2,颠倒混匀,冰浴5分钟。
- 12000rpm离心5分钟。
- 此步骤离心去除去垢剂,蛋白以及多糖等杂质。
- 取上清(通常为400μL)转移到过滤柱CF中,12000rpm离心1分钟。
- 将滤出液转移到1.5mL离心管中,加入1.5倍体积(例如400μL的上清液加600μL缓冲液AP3)缓冲液AP3(使用前请注意是否已经加入无水乙醇),立即颠倒混匀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。
- 吸取步骤6中的混合液加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中),12000rpm离心1分钟,倒掉废液,吸附柱CG放回收集管中。
- 离心吸附柱的最大容积是700μL,如果一次不能完全上柱,可以分次上柱离心,保证全部溶液全部加到离心柱中。
- 向吸附柱CG中加入500μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉废液,吸附柱CG放入收集管中。
- 重复步骤8。
- 可选步骤:如果离心柱的吸附膜上有颜色,向吸附柱CG中加入500μL无水乙醇,12000rpm离心1分钟,倒掉废液,吸附柱CG放入收集管中。
- 将吸附柱CG放回废液收集管中,12000rpm离心2分钟。
- 此步骤非常重要,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
- 将吸附柱CG转入一个干净的1.5mL离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50~100μL经65℃水浴预热的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,12000rpm g离心2分钟。
- 洗脱缓冲液体积最好不少于50μL,体积过小影响回收效率。
- 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
- 洗脱缓冲液体积最好不少于50μL,体积过小影响回收效率。
- DNA产物-20℃保存。
DNA浓度及纯度检测:
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时,OD260/OD280比值应为1.7~1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。
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